ELISA試驗中為什么要避免產生氣泡
通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍,導致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內反應不均一。
包被時有氣泡的話,將導致包被不*實際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。
封閉時有氣泡的話,將導致大量未結合位點的存在,引起非特異性結合--本底增高,假陽性。
加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性。
加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。
加顯色液時有氣泡的話---顯色不*。
加終止液時有氣泡的話,1。不能*終止反應 2。影響酶標儀比色,OD值增高
洗滌時有氣泡的話,非特異性結合物不能*洗去,做無用功。
避免方法:
1。加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過快過猛。
2。封閉時一定要加滿孔,
3。洗滌時一定要加滿孔(重要),氣泡會浮上來zui終驅除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。