丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒(méi)有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,-20℃保存,培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.
丙酮酸鈉是zui常見(jiàn)的丙酮酸鹽,是一類(lèi)內(nèi)源性小分子物質(zhì),丙酮酸鈉和丙酮酸均是天然存在于人體內(nèi),并參與全身各組織和器官的代謝。丙酮酸鈉在醫(yī)學(xué)上、診斷試劑以及醫(yī)療器械中被廣泛用作緩沖劑、賦形劑和抗氧化劑。此外丙酮酸鈉在細(xì)胞培養(yǎng)中也是常用到的試劑之一,那么丙酮酸鈉在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用是什么呢?
酮酸鈉在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用:丙酮酸鈉在人體日常生活中,是惹你進(jìn)行代謝生命活動(dòng)所必須的,它是一種能量物質(zhì),在科學(xué)研究進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中,科學(xué)研究工作人員還發(fā)現(xiàn)了有作用類(lèi)似的物質(zhì),類(lèi)似參與身體代謝活動(dòng)的為人體提供行動(dòng)的能量的物質(zhì)還有葡萄糖,乳酸鈉等,在人體中大多數(shù)細(xì)胞只利用葡萄糖就夠了,在細(xì)胞培養(yǎng)中丙酮酸鈉是必須的物質(zhì)。丙酮酸鈉在培養(yǎng)基中起到替代碳源的作用,參與細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)代謝。
丙酮酸鈉制備:
將領(lǐng)取的丙酮酸在車(chē)間內(nèi)放置一小時(shí)以上,將抽料管用干凈的聚酯纖維布包住管口,緩緩插入桶底部,用真空將丙酮酸 280kg抽入丙酮酸鈉反應(yīng)罐內(nèi),抽畢,開(kāi)攪拌,開(kāi)攪拌,將預(yù)處理好的38~42℃碳酸鈉溶液緩緩壓至反應(yīng)罐內(nèi)(控制壓力在0.03~0.06MPa),控制反應(yīng)罐內(nèi)溫度不超過(guò)35℃(若反應(yīng)過(guò)程中,溫度超過(guò)35℃,應(yīng)采取降溫措施),反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)進(jìn)行pH值檢測(cè),當(dāng)反應(yīng)液pH值達(dá)到4.8~5.3(用精密試紙測(cè)定)時(shí)停止加料,控制加料時(shí)間約1小時(shí),反應(yīng)完畢,將1440kg 95%乙醇緩緩抽入(管口應(yīng)用干凈的聚酯纖維布包住)反應(yīng)罐內(nèi)(加入時(shí)速度應(yīng)先慢后快,開(kāi)始50%的量加入時(shí)間應(yīng)控制在60分鐘內(nèi),后50%的量加入時(shí)間控制在30分鐘內(nèi)),抽畢,離心甩干,放入不銹鋼桶內(nèi)送入烘房,倒入雙錐真空干燥箱內(nèi),控制真空度≥-0.09Mpa,熱水溫度為75~80℃,真空干燥器內(nèi)溫上升為65℃時(shí),記錄起烘時(shí)間,控制真空干燥器內(nèi)溫度為65~70℃,保溫2小時(shí),自起烘2小時(shí)后,請(qǐng)驗(yàn),干失≤0.5%,冷卻約20分鐘,出料,用20目過(guò)篩,包裝,入庫(kù)。收率應(yīng)在105±5%之間。
Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會(huì)變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織,用Hanks液就可以了。